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学术前沿
血浆对细胞因子诱导杀伤细胞增殖、表型和毒性影响的研究
发表时间:2008-01-15 发表者:许凝 (访问人次:7)

在本实验室几千倍扩增细胞因子诱导杀伤(CIK)细胞培养方案下,为了优化CIK细胞的培养方案并进一步推广到临床,本文比较了无血清培养基X-Vivo 15、成年人AB血浆(ABP)、脐带血血浆(CBP)和胎牛血清(FBS)对CIK细胞增殖、表型和毒性的影响。人外周血单个核细胞分别以四种培养基诱导CIK细胞,细胞增殖、表型和毒性的测定分别用MTT增殖分析法,流式细胞分析法,乳酸脱氢酶细胞毒性分析法。

实验结果如下:ABP组细胞扩增倍数最大(图1),20天达到649倍(574-974倍),FBS组细胞扩增倍数最小,20天扩增175倍(5-887倍),二者有显著差异(P<0.05,n=7),其它各组之间无显著差异。X-Vivo 15组和CBP组扩增倍数分别为274倍(33 -364倍)、363倍(175 -412倍),ABP组和CBP组具有较稳定的细胞扩增能力,而X-Vivo 15组和FBS组的细胞扩增倍数变化范围很大。各组都可以诱导出CD3+CD56+细胞,即CIK细胞。第15-16天,X-vivo15组、ABP组、CBP组和FBS组CIK细胞比例分别为22.5%±9.1%、25.6%±6.8%、32.4%±7.9%和16.7%±4.3%,各组之间细胞表型无显著差异(P>0.05,n=7)。X-vivo15组的NK毒性和LAK毒性均十分低(图2),与其它各组差异极显著(P<0.01,n=7)。ABP组、CBP组和FBS组的NK毒性分别为47.6%±9.4%、66.5%±9.8%、42.1%±7.3%,CBP组的NK毒性大于ABP组和FBS组,但无统计学意义。

本研究说明血浆对于CIK细胞毒性的形成有着十分重要作用,临床应用时有必要添加一定浓度的血浆。然而其它的研究结果显示无血清培养基AIM-V诱导的CIK细胞却可以形成明显毒性,这种差异可能是由于两种无血清培养基成分的不同。另外,值得注意的是X-vivo15组细胞的高比例CD3+CD56+表型和该细胞极低的细胞毒性,说明CIK细胞的CD3+CD56+表型和细胞毒性之间可能并没有直接的相关性。由于胎牛血清成分的不确定性,胎牛血清原则上不能用于临床治疗。成年人血浆和脐带血血浆除了可以形成较高毒性的CIK细胞外,在扩增方面既有很强的促进细胞增殖能力,同时具有相对的扩增稳定性。脐带血血浆在临床异体移植中存在一定的局限性,例如来源有限、检验繁琐等,所以成年人血浆更有临床意义。

图1:培养基对细胞增殖的影响,基本培养基RPMI1640,γ-干扰素(1000U/ml ),CD3单抗(10ug/ml),白细胞介素

-2(500U/ml)

图3:培养基对细胞毒性的影响,15-16天, 靶细胞:K562细胞(NK毒性)和RAJI细胞(LAK毒性),效靶比:30:

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